Transformation de bactéries électro-compétentes

Electroporation de bactéries électro compétentes

- Prendre un tube de bactéries électro compétentes à -80°C (Top10F’)

- Utiliser 100 µl de bactéries compétentes + 1 µl d’ADN , ne pas trop charger en solution d’ADN car c’est chargé en sel, et au moment de la décharge ça peut déclencher un arc électrique, et l’électroporation ne fonctionne pas dans ces conditions.

- Préparer des cuves d’électroporation avec le bouchon jaune, y placer les bactéries + l’ADN à électroporer. (Garder ces cuves d’électroporation dans la glace)

- Utiliser l’électroporateur avec les paramètres suivants Ecl2 (pour les bactéries). Pour les appareils anciens prendre comme paramètre 2.5 kV et durée de la décharge 50 ms.

- Une fois la décharge effectuée, mettre 900 µl du milieu LB immédiatement dans la cuve qui vient d’être électroporer.

- Puis 1h à 37°C avec d’étaler sur boite ou dans les milieux sélectifs.