ATTENTION TRAVAILLER à FROID
- Pré-culture de 5ml 2yt sans antibio, 200 rpm à 37°C
- Culture de 500ml en milieu stérile 2YT
- Les cultiver jusqu'a DO 0.5-0.7
- Mettre l'erlen dans l'eau glacé
- Répartir en 10 X 50ml
- Centrifuger 6min à 5000g à 4°C
- Eliminer le surnageant
- Mettre les culots dans la glace
- Resuspendre doucement avec 25ml d'eau glacée
- Pooler les tubes afin d'avoir 5 tubes corning avec 50ml
- Centrifuger 6min à 5000g à 4°C
- Eliminer le surnageant
- Resuspendre avec 12.5ml d'eau glacée
- Pooler les tubes afin d'avoir 2 tubes corning
- Centrifuger 6min à 5000g à 4°C
- Eliminer le surnageant
- Resuspendre avec 6.25ml d'eau glacée
- Pooler les tubes afin d'avoir 1 tube corning
- Centrifuger 6min à 5000g à 4°C
- Eliminer le surnageant
- Resuspendre le tube avec 3.2ml d'eau glacée, et rajouter 800µl de glycérol 50%
- Faire des aliquots de 100µl
- Flash freezer avec de l'azote liquide, si possible sinon congélation à -80°C directe
- Congeler à -80°C
