vendredi 13 juin 2008

Transformation de bactéries chimio-compétentes

Principe : Introduire un plasmide dans une bactérie, afin de multiplier ce plasmide et l'utiliser pour d'autres applications, ou de produire une protéine avec l'utilisation de bactérie compétente du type BL21DE3gold.

1. Refroidir les bactéries compétentes sur la glace

2. Transférer 100µl/transformations de bactéries compétentes dans les tubes sur la glace

3. Ajouter 1-2 µl de produit de ligation ou de plasmide

4. Laisser sur la glace 30 min

5. Faire le choc thermique à 42 °C pendant 45 sec, puis le mettre immédiatement dans la glace

6. Ajouter 800-900 µl de milieu LB ou 2YT et incuber à 37 °C pendant 45 min

Etaler 100-200 µl sur milieu 2YT ou LB agar et ­ incuber à 37 °C overnight

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