Les bases puriques et purimidiques absorbant fortement à 260nm, on a une unité de densité optique à 260nm correspond :
- pour une solution d'ADN double brin à 50µg/ml
- pour une solution d'ARN ou d'ADN simple brin à 25µg/ml
Ces valeurs s'appliquent à des acides nucléiques parfaitement purs et en solution homogène.
Aussi il convient de rechercher une éventuelle contamination protéique car les protéines absorbent non seulement à 280nm mais aussi à 260nm. Pour cette raison on effectue une seconde mesure de DO à 280nm. Un ADN pur doit avoir un rapport DO 260 / DO 280 compris entre 1,8 et 2.Une éventuelle contamination par du phénol peut être recherchée en mesurant l'absorption à 270nm.
Exemple :
Conc ADN = DO260 X 50µg/ml X facteur de dilution
Conc ADN = 0,256 X 50µg/ml X 20 (généralement je fais 5µl d'ADN dans 95µl d'eau, dilution au 20eme)= 152µg/ml ou 152ng/µl
Quantité totale = 152 X 50µl = 7600ng ou 7,6µg
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