Production de bactéries chimio-compétentes

Travailler à froid durant toute la manip

- Pré culture de 5 ml de 2yt sans antibio (ou avec), à partir du master stock, 200 rpm à 37°C
- Inoculer avec 1% de préculture, une culture de 200 ml de 2yt en milieu stérile
- A DO600 environ 0,5 à 0,7, placer la culture dans la glace 10min
- Répartir en 4X50 ml dans des tubes corning
- placer la culture dans la glace 10min
- Centrifuger 15min à 3000 rpm à 4°C
- Éliminer le surnageant
- Mettre les culots dans la glace
- Resuspendre très doucement (à l'aide d'une pipette de 50ml) avec du CaCl2 50-100mM, 25ml dans chaque tube.
- Centrifugation 15min à 3000rpm
- Resuspendre très doucement (à l'aide d'une pipette de 50ml) avec du CaCl2 50-100mM, 25ml dans chaque tube.
- Laisser 30 minutes dans la glace
- Rassembler dans 2 tube de 50ml
- Centrifugation 15min à 3000rpm
- Resuspendre doucement avec 1.6 ml de CaCl2 50-100mM et glycérol 10% (400µl de glycérol 50%) pour chacun des 2 tubes, puis pooler les 2 tubes, on a 4 ml de bactéries.
- Aliquoter par 100µl
- Flash freezer dans l'azote liquide si possible, sinon congélation à -80°C directe

Conservation 3 mois max