Utilisation du kit "wizard genomics DNA purification kit" de promega
Le moins evident de pouvoir apprecier l'effet de la lyticase
1- Préculture O/N de S228g dans 5ml de milieu YPD à 30°C et 200rpm
2- Culture de 10ml en milieu YPD pendant 20h à 30°C
3- Centrifuger 2min à 13000g à8°C
5- Addition de 100µl de lyticase 20mg/ml (moi dans mon cas j'ai commander cette lyticase chez sigma refL2524-25KU)
6- Incubation à 37°C pendant 2h
7-Centrifugation à 13000g pendant 2min à8°C
8- Resuspendre dans 3ml de Nuclei Lysis Solution
9- Ajouter 1ml de proteine precipitation solution, vortexer et incuber 5min dans la glace
10- Centrifugation à 13000g pendant 3min à8°C
11- Transferer le surnageant dans un tube propre et ajouter 3ml d'isopropanol (mis à RT avant) et mélanger par retournemant de tube.
12- Centrifugation à 13000g pendant 2min à8°C
13- Vider le surnageant et laver avec 3ml d'éthanol 70% (mis à RT avant)
14- Centrifugation à 13000g pendant 2min à8°C
15- Vider le maximun d'éthanol par pipettage et laisser évaporer le reste
16- Rehydrater dans 500µl de DNA rehydration solution
17- Ajouter 15µl de Rnase et incuber 15min à 37°C
18- Laisser finir la rehydratation en placant le tube O/N à 4°C ( ou 1h à 65°C)
Modifications :
- à 20 on suit le protocole en adaptant les volumes ( données pour 1ml de culture dans le protocole Promega), au final on remet l'ADN en solution en tampon TE10.1)
A la fin de 10ml de culture on récupère 500µl de solution d'ADN à environ 100ng/µl, ce qui permet de faire environ 500PCR.
